Stolica verzus krv: prečo na tú istú otázku dostanete 2 rôzne odpovede
Ak vám povedali, že máte v poriadku aj stolicu aj krv, a napriek tomu sa roky necítite dobre, prečítajte si toto. Nepôjde o to, že by niekto zlyhal. Pôjde o to, čo sa vlastne meralo.
Kontajner pred domom
Chcete vedieť, kto býva v paneláku. Máte 2 možnosti. Buď preberiete kontajner pred vchodom, alebo pozvoníte na zvončeky.
Rozbor stolice je ten kontajner. Zistíte z neho prekvapivo veľa. Ale o človeku z 1. poschodia, ktorý takmer nič nevynáša, sa nedozviete nič.
To nie je kritika laborantiek. Je to vlastnosť vzorky. A tá sa nedá prekonať lepším prístrojom.
Čo stolica ukáže a čo nie
Je to obsah hrubého čreva, koniec trate
Mikróby v čreve nežijú len voľne v obsahu. Veľká časť z nich sedí prilepená na hlienovej vrstve a na sliznici. Práve tie sú v priamom kontakte s imunitou. A práve tie sa do stolice dostanú len čiastočne.
Keď vedci porovnávali slizničné vzorky so stolicou, opakovane našli rozdiely. Pri premnožení baktérií v tenkom čreve to bolo najvýraznejšie: zmena sa ukázala na sliznici, v stolici nie. Diverzita vo vzorkách z dvanástnika a ilea bola vyššia než v stolici.
Čiže ak problém sedí hore alebo na sliznici, stolica ho pokojne prehliadne.
Kultivácia potrebuje, aby baktéria prežila a chcela rásť
Vezmite vzorku, dajte ju na živnú pôdu, čakajte. Takto to funguje.
Lenže drvivá väčšina črevných baktérií sú prísne anaeróby. Kyslík je pre ne jed. Časť odumrie počas transportu. Ďalšia časť nenarastie, lebo potrebuje niečo, čo na tej pôde nie je.
Áno, dá sa to spraviť lepšie. Kanadský tím ukázal, že pri veľmi starostlivej práci sa dopestuje aj 95 percent toho, čo je vo vzorke. Ibaže na to potrebovali 66 kultivačných podmienok a anaeróbnu komoru. To nie je bežný odber v ambulancii a taška v aute.
Čo nenarastie, vo výsledku nie je. Tak jednoducho.
Po antibiotikách je výsledok na nič
Poškodené bunky nenarastú. Papier môže vyjsť takmer prázdny a vy si poviete, že je vyčistené. Nie je.
Sekvenačné testy mikrobiómu?
Tie riešia 1 z týchto vecí. Prečítajú DNA aj z mŕtvej bunky, takže kultivačný problém odpadá.
Ale stále je to stolica. Stále hovoria hlavne o hrubom čreve. A väčšinou hovoria v percentách, teda kto má aký podiel, nie koľko toho reálne je.
Ako pracuje test mikrobiálnych markerov
Východisko je jednoduché. Mikróby sú chemicky iné ako my.
Človek má niečo cez 20 druhov mastných kyselín. Mikroorganizmy vyše 200. A v ich bunkových stenách sú látky, ktoré ľudské telo nevyrába vôbec:
Kyselina muramová. Stavebný kameň peptidoglykánu, teda bakteriálnej steny. V ľudskom tele nemá iný pôvod ako bakteriálny. Bodka.
3-hydroxy mastné kyseliny. Jadro endotoxínu gramnegatívnych baktérií.
Ergosterol a pár špecifických mastných kyselín. Plesne.
Zmeria sa to plynovou chromatografiou s hmotnostnou spektrometriou. Chromatografia zmes rozdelí na jednotlivé zložky, spektrometer každú z nich identifikuje podľa spektra a povie, koľko jej tam je. Tá istá metóda sa používa na dopingové kontroly a v metabolomike platí za referenčnú.
Výsledok nie je zoznam s fajkami. Sú to čísla. Vyše 50 mikroorganizmov naraz, baktérie, plesne aj vybrané vírusy.
Prečo krv
Lebo sa tým pýtame na niečo iné.
Časť mikrobiálnych molekúl prechádza z čreva cez črevnú stenu do obehu. To nie je hypotéza, to je popísané. Existujú práce, kde merali 3-hydroxy mastné kyseliny priamo v sére pacientov a ich vzostup súvisel so zvýšenou priepustnosťou čreva.
Takže krv neodpovedá na otázku „kto býva v hrubom čreve“. Odpovedá na otázku „čo mi cez tú stenu preteká a zaťažuje ma“. Pri chronických stavoch je to podľa mňa užitočnejšia otázka.
Vedľa seba
| Porovnanie | Kultivácia stolice | Sekvenačný test, stolica | Mikrobiálne markery, krv |
|---|---|---|---|
| Vzorka | stolica | stolica | krv, aj suchá kvapka |
| Čo reprezentuje | hrubé črevo | hrubé črevo | systémová záťaž |
| Musí mikrób prežiť? | áno | nie | nie |
| Anaeróby | obmedzene | áno | áno |
| Vplyv antibiotík | veľký | stredný | malý |
| Plesne | slabo | podľa panelu | áno |
| Typ výsledku | prítomné / neprítomné | percentá | konkrétne čísla |
| Rozsah | pár druhov | stovky až tisíce | vyše 50 |
| Na opakovanie | ťažko | áno | áno |
Tabuľka nehovorí, že 1 metóda je zlá. Hovorí, že každá odpovedá na niečo iné. Problém nastáva vtedy, keď od stolice čakáte odpoveď, ktorú vám dať nevie.
Komu to odporúčam
Ľuďom, ktorí majú roky ťažkosti a v štandardných vyšetreniach je čisto. Pri podozrení na premnoženie v tenkom čreve. Keď sa zápaly stále vracajú. Po opakovaných antibiotikách. Pri únave, ktorá sa nedá vyspať. Pri koži, kde tušíme črevo.
A vtedy, keď sme už niečo robili a potrebujem vidieť, či sa čísla naozaj pohli, alebo si to len nahovárame.
Komu nie
Akútny stav ide k lekárovi. Horúčka, krv v stolici, prudké chudnutie. Toto neriešim ja a nemá zmysel na to čakať týždeň.
Test nenahradí kolonoskopiu, zobrazovacie vyšetrenie ani histológiu. Nie je to onkologický skríning.
A ak si chcete len spraviť test a nič nemeniť, nerobte to. Číslo v tabuľke nikoho neuzdravilo. Hodnotu to má vtedy, keď z toho vznikne plán a ten sa začne robiť.
Na čo sa ma pýtajú najčastejšie
Je to oficiálne uznaná metóda?
Poviem to na rovinu, lebo inak by ste sa to aj tak dozvedeli. Analytický princíp, teda meranie mikrobiálnych chemických markerov cez GC-MS, je v odbornej literatúre dobre popísaný a používajú ho nezávislé tímy v Švédsku, Poľsku aj v USA. Metódu ako celok rozpracoval prof. Osipov a je patentovaná. Ale konkrétna klinická interpretácia profilu z krvi stojí zatiaľ hlavne na 1 výskumnej škole a nie je súčasťou štandardných odporúčaní v EÚ. Preto s ňou pracujem ako s doplnkovým nástrojom, nie ako s náhradou lekárskej diagnostiky.
Ako sa odoberá?
Klasicky zo žily, alebo metódou suchej kvapky krvi. Tú zvládnete doma sami.
Musím niečo držať pred testom?
Príprava je jednoduchšia ako pri stolici. Presné pokyny pošlem pri objednaní.
Kedy budem mať výsledok?
Samotná analýza je otázka hodín. Reálne rozhoduje logistika, kým sa vzorka dostane do laboratória.
Môžem ísť na to po antibiotikách?
Môžete, metóda nepotrebuje živé bunky. Aj tak odporúčam nechať odstup, nech výsledok ukazuje stabilný stav a nie práve prebiehajúci rozvrat.
Nahradí mi to test stolice?
Nie vždy. Niekedy dáva zmysel oboje. Záleží na tom, čo vás trápi a čo už máte spravené.
Krátko na záver. Ak vás roky trápi niečo, na čo bežné testy nedávajú odpoveď, väčšinou nepotrebujete iné laboratórium. Potrebujete inú otázku.
Vedecké zdroje
Nižšie sú publikácie, o ktoré sa metóda opiera. Rozdelila som ich podľa toho, čoho sa týkajú, lebo nie sú rovnako silné a bolo by nefér tváriť sa, že áno. Pri každej je odkaz, takže si to viete otvoriť a prečítať sami.
1. Priamo k metóde mikrobiálnych markerov
Osipov GA, Verkhovtseva NV. Study of human microecology by mass spectrometry of microbial markers. Beneficial Microbes. 2011;2(1):63-78.
DOI: 10.3920/BM2010.0017 · PubMed
Kľúčová prehľadová práca v angličtine v recenzovanom časopise. Popisuje princíp súčasného stanovenia vyše 100 mikrobiálnych mastných kyselín vo vzorke bez predchádzajúcej kultivácie. Ak chcete 1 odkaz, tak tento.
Platonova AG, Osipov GA, Boiko NB, Kirillova NV, Rodionov GG. Chromatography-mass spectrometry analysis of microbial fatty acids in human biological fluids and their clinical significance. Klinicheskaia Laboratornaia Diagnostika. 2015;60(12):46-55.
Metodický prehľad zameraný na klinickú prax. Vysvetľuje výber markerov pre analýzu krvi a ďalšieho klinického materiálu. V ruštine s anglickým abstraktom.
Khabib ON, Beloborodova NV, Osipov GA. Detection of bacterial molecular markers in the tissue of cardiac valves in normal and pathological states by GC-MS. Zhurnal Mikrobiologii, Epidemiologii i Immunobiologii. 2004;(3):62-68.
Analýza tkaniva srdcových chlopní 31 pacientov. Kvantifikácia asi 200 mikrobiálnych mastných kyselín, aldehydov a sterolov. Príklad aplikácie na reálnom klinickom materiáli.
Krymtseva TA, Osipov GA, Boiko NB a kol. Minor fatty acids of biological fluids of urogenital organs and their significance in the diagnosis of inflammatory processes. Zhurnal Mikrobiologii, Epidemiologii i Immunobiologii. 2003;(2):92-101.
Štatistická analýza 500 vzoriek. Porovnanie markerovej metódy s klasickou kultivačnou bakteriológiou.
Osipov GA, Demina AM. Chromatographic mass spectrometry detection of microorganisms in anaerobic infectious processes. Vestnik Rossiiskoi Akademii Meditsinskikh Nauk. 1996;(2):52-59.
Skoršia práca k detekcii anaeróbov, teda tej skupiny, ktorá je pri kultivácii najproblematickejšia.
2. Nezávislé práce k princípu metódy
Toto je dôležitá časť. Nasledujúce publikácie nepochádzajú od autorov metódy. Potvrdzujú, že samotný princíp, teda detekcia mikroorganizmov cez ich chemické markery metódou GC-MS, je etablovaný v medzinárodnej odbornej literatúre.
Larsson L. Determination of microbial chemical markers by gas chromatography-mass spectrometry: potential for diagnosis and studies on metabolism in situ. APMIS. 1994;102(3):161-169. (Lund University, Švédsko)
DOI: 10.1111/j.1699-0463.1994.tb04861.x · PubMed
Prehľadová práca k 3 hlavným skupinám markerov: kyselina muramová ako marker peptidoglykánu, 3-hydroxy mastné kyseliny ako marker endotoxínu, ergosterol ako marker plesňovej biomasy. Presne tie látky, na ktorých metóda stojí.
Bal K, Larsson L. New and simple procedure for the determination of muramic acid in chemically complex environments by GC-ion trap tandem MS. Journal of Chromatography B. 2000;738(1):57-65.
DOI: 10.1016/S0378-4347(99)00494-6 · PubMed
Analytická validácia stanovenia kyseliny muramovej vrátane reprodukovateľnosti, citlivosti a špecificity.
Kraśnik L, Szponar B, Walczak M, Larsson L, Gamian A. Routine clinical laboratory tests correspond to increased serum levels of 3-hydroxy fatty acids, markers of endotoxins, in cardiosurgery patients. Archivum Immunologiae et Therapiae Experimentalis. 2006;54(1):55-60.
DOI: 10.1007/s00005-006-0006-2 · PubMed
Priamo relevantné. 3-hydroxy mastné kyseliny boli metódou GC-MS merané v sére pacientov a ich zvýšenie sa spájalo so zvýšenou priepustnosťou čreva a prienikom endotoxínu do obehu. Nezávislá práca poľského a švédskeho tímu.
Reynolds SJ, Milton DK, Heederik D a kol. Interlaboratory evaluation of endotoxin analyses: comparison of LAL assay and mass spectrometry. Journal of Environmental Monitoring. 2005;7(12):1371-1377.
DOI: 10.1039/b509256f · PubMed
Medzilaboratórne porovnanie 5 laboratórií. Ukazuje, že GC-MS stanovenie 3-hydroxy mastných kyselín poskytuje informáciu navyše oproti klasickému biologickému testu.
3. Kontext: prečo má zmysel merať mikrobiálnu záťaž v krvi
Ghosh SS, Wang J, Yannie PJ, Ghosh S. Intestinal Barrier Dysfunction, LPS Translocation, and Disease Development. Journal of the Endocrine Society. 2020;4(2):bvz039.
DOI: 10.1210/jendso/bvz039 · Plný text zadarmo
Prehľad o tom, ako poškodená črevná bariéra umožňuje prienik bakteriálneho endotoxínu do obehu a ako to súvisí s rozvojom viacerých ochorení.
Ramendra R, Isnard S, Mehraj V a kol. Circulating LPS and (1→3)-β-D-Glucan: A Folie à Deux Contributing to Immune Activation. Frontiers in Immunology. 2019;10:465.
DOI: 10.3389/fimmu.2019.00465 · Plný text zadarmo
O tom, že do obehu prenikajú markery baktérií aj plesní súčasne a spoločne aktivujú imunitný systém.
Rainer F, Horvath A, Sandahl TD a kol. Soluble CD163 and soluble mannose receptor correlate with gut permeability and bacterial translocation. Alimentary Pharmacology & Therapeutics. 2018;47(5):657-664.
DOI: 10.1111/apt.14474 · PubMed
Klinická štúdia na 101 pacientoch. Ukazuje súvislosť medzi priepustnosťou čreva, bakteriálnou translokáciou a závažnosťou ochorenia.
4. Kontext: hranice vyšetrení zo stolice
Lau JT, Whelan FJ, Herath I a kol. Capturing the diversity of the human gut microbiota through culture-enriched molecular profiling. Genome Medicine. 2016;8(1):72.
DOI: 10.1186/s13073-016-0327-7 · Plný text zadarmo
Ukazuje, koľko úsilia je potrebné, aby sa črevné baktérie skutočne dopestovali. 66 kultivačných podmienok a práca v anaeróbnej komore. Bežná kultivácia takéto podmienky nemá.
Mucosa-Associated Microbial Profile Is Altered in Small Intestinal Bacterial Overgrowth.
Zmena bola viditeľná v slizničnej mikroflóre, ale nie v stolici.
Compositional and functional differences of the mucosal microbiota along the intestine of healthy individuals. Scientific Reports. 2020;10:14977.
Mikrobiálna diverzita vo vzorkách stolice bola významne nižšia než v slizničných vzorkách z dvanástnika a ilea.
Kde je hranica
Poviem aj to, čo sa v takýchto zoznamoch zvykne zamlčať.
Samotný princíp, teda že sa mikróby dajú detekovať cez ich chemické markery pomocou GC-MS, je poriadne podložený. Larsson, Szponar, Gamian a ďalší to robili nezávisle od autorov metódy a v úplne iných krajinách.
Horšie je to s konkrétnou klinickou interpretáciou profilu z krvi tak, ako ju robí škola podľa Osipova. Tá stojí zatiaľ hlavne na 1 výskumnej línii. Nezávislé validačné štúdie v západnej literatúre chýbajú a metóda nie je v štandardných odporúčaniach v EÚ.
Preto s ňou pracujem ako s doplnkom. Nie ako s diagnostikou a nie ako s jediným podkladom, na základe ktorého sa niečo rozhoduje.
Zoznam publikácií bol zostavený s využitím databázy PubMed (National Library of Medicine). Odkazy vedú na pôvodné zdroje, kde si môžete overiť plné znenie.
Informačný text. Nenahrádza lekárske vyšetrenie, diagnózu ani liečbu.